Identification de nouveaux récepteurs impliqués dans la phagocytose rétinienne circadienne

L'épithélium pigmentaire rétinien (EPR) remplit des fonctions cruciales pour la survie des photorécepteurs, dont la phagocytose de leurs segments externes (SEP). La phagocytose réalisée par l'EPR se caractérise par son activité rythmique circadienne. Sur le plan moléculaire, la phagocytose des SEP par l'EPR se déroule de la même manière que l'élimination des cellules apoptotiques par les macrophages. Cependant, et à l'inverse des macrophages, malgré un contact constant entre ces deux types cellulaires la phagocytose des SEP n'est réalisée qu'une seule fois par jour. De plus, une fois déclenchée cette phagocytose s'arrête assez vite, nécessitant donc une régulation très fine de cette fonction. L'EPR exprime à sa surface apicale une panoplie de récepteurs qui agissent directement ou comme corécepteurs régulateurs, et qui ont été étudiés chez les macrophages mais pas sur les cellules de l'EPR. Ainsi, nous avons sélectionné le Cluster de Différentiation 14 (CD14), le Toll-like récepteur 4 (TLR4) et le facteur d'adhésion intercellulaire 3 (ICAM3) comme candidats intéressants. L'objectif de ma thèse a donc été de caractériser leur implication dans la phagocytose rétinienne circadienne, seuls ou en tant que corécepteurs. Mes travaux de thèse confirment que CD14 et TLR4 sont exprimés dans l'EPR in vitro et in vivo. Sur les cellules de rat RPE-J, la colocalisation entre les deux récepteurs et l'effet de leur inhibition au niveau génique et protéique montrent qu'ils sont impliqués dans la régulation de la phagocytose rétinienne en tant que corécepteurs. De plus, l'effet de l'inhibition conjointe de CD14 et TLR4 sur les macrophages J774 est différent de celui enregistré pour les cellules RPE-J, suggérant une action tissu spécifique dans la rétine. L'étude des voies de signalisation sous-jacentes montre que l'interaction CD14-TLR4 active la MAPKK p44/42 (Erk1/2) de la voie de signalisation dépendante de MyD88. Cette activation en dehors du cadre proinflammatoire existant chez les macrophages renforce ainsi l'idée d'action tissu spécifique du couple CD14-TLR4. In vivo, l'expression accrue de CD14 et TLR4 juste avant/pendant la phagocytose semble confirmer leur contribution à cette fonction, une idée renforcée par l'absence de pic chez les souris Tlr4-/-.Concernant ICAM3, les études d'expression sur les cellules RPE-J montrent qu'il est faiblement exprimé dans l'EPR. De plus, l'inhibition génique et protéique d'ICAM3 n'a aucun effet sur ces cellules. Cependant, un effet sur la phagocytose est observé après inhibition d'ICAM3 par anticorps bloquants sur les SEP, ce qui suggère la présence d'ICAM3 plutôt au niveau des SEP et donc une action en « face-à-face », une possibilité d'action déjà observée dans d'autres tissus. L'expression génique et protéique de ICAM3 confirme que le récepteur est faiblement exprimé dans l'EPR et est plutôt présent dans la rétine.