Isolamento e caracterização de amebas de vida livre e vírus gigantes

As amebas de vida livre são microrganismos unicelulares encontrados em diversos ambientes, onde exercem funções ecológicas importantes, como a regulação de comunidades microbianas. Além de seu papel ecológico, essas amebas têm se destacado por serem hospedeiras de vírus gigantes, que possuem uma estrutura e complexidade genômica surpreendentes, desafiando conceitos tradicionais sobre a natureza dos vírus. A coevolução e as interações entre amebas e esses vírus gigantes abrem novas possibilidades para compreender a biologia viral, revelando uma diversidade genética ainda pouco explorada. Deste modo, o objetivo deste trabalho é desenvolver e aplicar protocolos para caracterizar a diversidade de amebas de vida livre e vírus gigantes, tanto a partir de amostras ambientais quanto de organismos cultivados em laboratório. A pesquisa foi conduzida sob a supervisão do Prof. Dr. Otavio Henrique Thiemann e do coorientador Leonardo Martins Delfino, contando com a colaboração dos Profs. Drs. Jonatas Santos Abrahão e Marcos Roberto Chiaratti, e das Profas. Dras. Lara Durães Sette e Juliana Reis Cortines. A metodologia do projeto incluiu o cultivo de Acanthamoeba castellanii em condições axênicas, com a indução de encistamento e o isolamento de culturas clonais. Partículas de Niemeyer vírus e Tupanvirus foram cultivadas, tituladas e purificadas, sendo utilizadas para a infecção de A. castellanii, com o intuito de estudar os efeitos citopáticos causados nos trofozoítos. Amostras ambientais de solo da Antártica e água de sítios do município de São Carlos - SP foram processadas para prospecção de Nucleocytoviricota, utilizando A. castellanii como organismo hospedeiro. Então, amostras de DNA ambiental foram extraídas e analisadas por reação em cadeia da polimerase, e os produtos sequenciados no LaGenBio (UFSCar). Como resultados do projeto, foi obtida uma cultura clonal de||A. castellanii com sucesso, além da indução eficiente de cistos utilizando meio salino Neff, apesar de uma alta taxa de mortalidade celular. A infecção com Niemeyer vírus e Tupanvirus resultou em altos títulos virais, confirmando a eficácia da metodologia. Por fim, as amostras ambientais revelaram desafios de contaminação que foram superados, enquanto o desenvolvimento de ferramentas bioinformáticas para análise de DNA segue em andamento. Futuramente, a pesquisa poderá avançar na identificação de genes desconhecidos e na compreensão das interações entre esses vírus e suas amebas hospedeiras. As descobertas nesse campo emergente podem oferecer soluções biológicas significativas, destacando a importância de métodos de análise mais eficazes.