Etude des mécanismes d’export des ribonucléocapsides du Virus Respiratoire Syncytial

Principal agent de la bronchiolite du nourrisson, le virus respiratoire syncytial (RSV) est responsable d’infections respiratoires sévères chez les enfants mais aussi chez les sujets âgés ou fragilisés. En dépit de son importance en santé publique, il n’existe à ce jour aucun vaccin ni traitement antiviral curatif contre le RSV. Dans ce contexte, une meilleure connaissance de ses mécanismes de réplication est essentielle pour proposer de nouvelles stratégies antivirales. Le RSV est un virus enveloppé à ARN négatif simple brin dont le cycle de réplication est exclusivement cytoplasmique. Les étapes de synthèse des ARN viraux ont lieu au sein d’inclusions cytoplasmiques appelées corps d’inclusion ou IBs. Lors de la réplication, les génomes néosynthétisés sont encapsidés par les protéines N et associés au complexe polymérase formant ainsi les ribonucléoprotéines virales (RNP). Ces RNPs rejoignent ensuite la membrane plasmique où ont lieu les étapes d’assemblage et de bourgeonnement. Les RNPs sont des objets volumineux qui ne peuvent pas diffuser librement dans le cytoplasme, mais les voies cellulaires impliquées dans leur transport restent inconnues à ce jour.Pour étudier le trafic des RNPs néosynthétisées, nous avons produit un virus recombinant exprimant une N fluorescente ce qui permet de visualiser pour la première fois les RNPs dans des cellules vivantes et d’analyser leurs trajectoires. Une majorité des RNPs présentent des mouvements de type brownien mais d’autres sont animés de mouvements rectilignes et rapides de l’ordre de 2µm/s évoquant un transport sur les microtubules. Nous avons en effet visualisé les mouvements des RNPs sur les microtubules marqués. La dépolymérisation des microtubules entraine un arrêt total des mouvements rapides des RNPs confirmant leur implication dans ces transports. De plus, lors de ces mouvements rapides les RNPs sont associées à Rab11, un marqueur de l’endosome de recyclage. L’observation des mouvements des RNPs et des vésicules Rab11 positives montrent en effet des RNPs animées de mouvement rapides qui semblent tirées par Rab11. La vitesse des RNPs et la distance qu’elles parcourent sont diminuées lors de l’inhibition transitoire de l’expression de Rab11a. Enfin des expériences d’immunoprécipitation mettent en évidence une interaction entre Rab11a et les RNPs. En conclusion, nos résultats démontrent que les RNPs du RSV utilisent les microtubules pour se déplacer en détournant la voie de recyclage des endosomes.