Formulation à libération prolongée de fragments d’anticorps

Les fragments d’anticorps représentent une des évolutions remarquables de la thérapie par anticorps du fait de leur propriétés uniques. Les éléments ayant favorisé leur développement sont la production dans des systèmes procaryotes, leur pénétration tissulaire et leur potentielle stabilité. Néanmoins, les fragments d’anticorps ne comportent généralement pas de fragment Fc ce qui implique une demi-vie plasmatique réduite et limite ainsi leur utilisation dans un cadre thérapeutique. De nombreuses stratégies pour dépasser cette limite ont été envisagées comme la conjugaison du fragment d’anticorps à une autre protéine type albumine ou à des chaines de PEG. La formulation peut être aussi une solution par l’utilisation d’un dispositif à libération prolongée du fragment d’anticorps, par exemple : l’utilisation de microparticules, d’un hydrogel, d’un implant…Notre projet porte sur la mise en place d’un dispositif à libération prolongée permettant le contrôle de la libération de fragments d’anticorps. Nous avons produit et caractérisé un fragment d’anticorps de type VHH ciblant l’antigène HER2. La caractérisation de cette production a permis d’appréhender l’influence du système de production sur la formation du pont disulfure intra-canonical et de son rôle fondamental sur la stabilité thermique d’un VHH. De plus, la caractérisation du VHHHER2 a permis d’appréhender les outils de screening fréquemment employés lors de la formulation de fragments d’anticorps. Nous avons évalué la compatibilité entre les fragments d’anticorps (VHHHER2, VHHEGFR1 et un tandem scFv bispécifique (TLR2 et CLEC4A)) et des polymères utilisés pour la réalisation d’un hydrogel, tels que le pNIPAAM, l’alginate et le poloxamer 407. Cette étude a permis d’évaluer l’influence des polymères sur la stabilité thermique de la structure tertiaire des fragments. Nos résultats attestent de la relation primordiale entre le pH, la force ionique et le polymère sur la stabilité thermique des fragments d’anticorps. Enfin, la conception du dispositif à libération prolongée a débuté par la production, par impression 3D, d’un implant en poly(lactide) servant de support à l’hydrogel contenant le fragment d’anticorps. L’association de l’implant avec l’alginate et le P407 permettent de prolonger de la libération du VHHHER2 sur une période de 13 jours. Le profil de libération se caractérise par un « burst-release » suivi d’une libération continue. Les résultats de ces expériences démontrent l’importance fondamentale de la caractérisation des fragments d’anticorps, de la pré-formulation et de l’étude de compatibilité avec les polymères.