Caractérisation biochimique et enzymatique de l’hélicase DDX3 : influence sur la dimérisation de l’ARN génomique du VIH

DDX3 est une hélicase à boîte DEAD humaine impliquée dans de nombreuses étapes du métabolisme de l'ARN. Elle joue un rôle clef pour la réplication du Virus de l'Immunodéficience Humaine de type 1 (VIH-1) et plus particulièrement dans l'export nucléaire de l'ARN génomique viral et dans sa traduction. Cependant, les bases moléculaires du rôle de cette protéine cellulaire pour le cycle viral ne sont pas connues, les propriétés biochimiques de DDX3 étant elles-mêmes incertaines. Au cours de ma thèse, j'ai effectué la caractérisation biochimique et enzymatique de DDX3 et j'ai confirmé qu'elle présente une activité hélicase dépendante de l'ATP. Plus encore, j'ai mis en évidence la présence de déterminants de spécificité dans l'ARN génomique du VIH-1 capables de stimuler l'activité de cette hélicase à un niveau encore jamais observé. En particulier, j'ai montré que DDX3 est capable de dissocier des dimères d'ARN génomique avec une efficacité remarquable. En utilisant la technique de SHAPE en temps réel, j'ai étudié les propriétés structurales de l'interaction de DDX3 avec l'ARN génomique et du remaniement qu'elle entraîne. Parallèlement, j'ai mis en évidence l'existence de différents mécanismes de dimérisation de l'ARN génomique en comparant deux sous-types couramment utilisés en laboratoire. Enfin, j'ai montré que la dimérisation pouvait être régulée post-transcriptionnellement par la méthylation des adénosines.