Etude des réponses T CD8+ après transfert de gène par rAAV ciblant le muscle

La thérapie génique par vecteurs dérivés des virus adéno-associés (rAAV), s'est imposée ces dernières décennies, comme une stratégie de traitement innovante, pour le traitement des maladies monogéniques rares. Elle est basée sur l'utilisation d'un vecteur d'origine virale, pour délivrer une séquence d'ADN fonctionnelle, dans les cellules présentant la mutation à l'origine de la maladie.Les avancées dans ce domaine ont conduit à la mise sur le marché de plusieurs produits, dont le ZolgenSMA®, utilisé pour le traitement de l'amyotrophie spinale, qui a permis de soigner plus de 4000 patients dans le monde à ce jour.Malgré ces résultats prometteurs, certains défis entravent encore l'efficacité et l'utilisation à plus large échelle de la thérapie génique par rAAV, notamment le développement de réponses immunitaires indésirables, pouvant compromettre l'efficacité du traitement, certaines fois conduisant à des complications sévères chez les patients. De tels effets délétères ont été recensés chez des patients traités avec le ZolgenSMA®, ou plus récemment dans des essais cliniques pour la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD), soulignant la nécessité de mieux comprendre la mise en place de ces réponses immunitaires contre le rAAV.Les réponses innées et adaptatives activées par l'administration de rAAV, sont dirigées contre le vecteur lui-même, ainsi que contre le transgène codé par celui-ci. De nombreux travaux ont montré que de multiples facteurs sont impliqués dans la mise en place de ces réponses, dont la spécificité du vecteur pour le tissu cible, la dose injectée et la voie d'injection.Dans cette étude, nous nous sommes particulièrement intéressés à la caractérisation des lymphocytes T CD8+ dirigés contre le transgène, après transfert de gènes par rAAV ciblant les tissus musculaires. Nous avons pour cela, étudié la mise en place de ces réponses et leur fonctionnalité chez la souris, dans deux systèmes qui diffèrent par les vecteurs rAAV utilisés et leur voie d'injection.Nous avons premièrement démontré que la réponse CD8+ peut démarrer dès 24h, suite à l'administration intramusculaire de vecteur, en raison du drainage lymphatique rapide des particules d'AAV dans les ganglions drainants le site d'injection. De plus, l'induction précoce des réponses CD8+ dépend de la spécificité de l'expression du transgène dans le tissu cible et dans les cellules hématopoïétiques pouvant présenter l'antigène.Dans la deuxième partie de ce projet, nous avons pu démontrer que l'administration intraveineuse d'un vecteur ciblant spécifiquement le muscle, induit des réponses CD8+ anti-transgène dysfonctionnelles, notamment dans un modèle murin de dystrophie musculaire. Ces cellules dirigées présentent des marqueurs d'épuisement, semblent fonctionnelles, mais sont incapables de rejeter les cellules transduites par le vecteur, garantissant le maintien de la correction génique durant au moins 6 mois.Ces résultats enrichissent notre compréhension des réponses CD8+ dirigées contre le transgène, et contribuent à proposer des stratégies rAAV plus sûres.