Moderne molekularbiologische Thrombophiliediagnostik: Die Genotypisierung der Faktor-V-Leiden- und der Prothrombin-G20210A-Mutation mit dem LightCycler™

ZusammenfassungDurch die Identifizierung zweier häufiger Ursachen der hereditären Thrombophilie, der Faktor-V-Leiden-Mutation und der Prothrombinvariante G20210A, hat sich in den letzten Jahren die diagnostische Strategie der Thrombophilieabklärung entscheidend erweitert. Bedingt durch die hohe Prävalenz dieser Mutationen und dem mit ihnen verknüpften erhöhten Thromboserisiko zählt der molekulargenetische Nachweis dieser beiden Risikofaktoren derzeit zu den am häufigsten durchgeführten DNA-Tests überhaupt. Die wachsende Bedeutung dieser Analytik stellt das Labor vor die Herausforderung, sichere und schnelle aber dennoch kostengünstige Methoden einzusetzen.Mit dem LightCycler™ von Roche Diagnostics steht nun ein Gerätesystem zur schnellen und halbmechanisierten Mutationsdetektion zur Verfügung, das auf innovativer Fluoreszenztechnologie basiert. Es kombiniert in einem Reaktionsansatz die extrem schnelle PCR-Amplifikation mit der unmittelbar nachfolgenden Genotypisierung des PCR-Produktes durch Schmelzkurvenanalyse mittels allelspezifischer Hybridisierungssonden. Aufgrund dieser Ein-Schritt-Methodik ist beim LightCycler die Gefahr der Probenverwechslung und der Kontamination praktisch eliminiert. Darüber hinaus sind die Analysezeiten mit ca. 45 Minuten für 32 Proben extrem kurz.Die LightCycler-Analytik erweist sich als schnell, robust und zuverlässig und ist aufgrund der geringen Bindung von Arbeitszeit hervorragend für den Einsatz in einem molekulargenetischen Labor geeignet.