DETERMINAÇÃO DA DL50 DE Streptococcus agalactie SOROTIPO IB EM TILÁPIAS-DO-NILO

Resumo: Um dos principais fatores que limitam a produção de tilápia é a ocorrência de bactérias oportunistas presentes na água e na microbiota dos peixes1 . A bactéria S. agalactiae causa grandes perdas na aquicultura no Brasil2 . Uma alternativa aos antibióticos na prevenção de infecções é a vacinação dos peixes, que induz anticorpos específicos, conferindo proteção e segurança ao hospedeiro imunizado. Desta forma, objetivou-se com este estudo determinar a DL50 da cepa de Streptococcus agalactie sorotipo Ib frente a inoculação em tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus). Todos os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA), da Universidade Brasil, (Protocolo N°2400023). Foram utilizadas 80 tilápias-do-Nilo adquiridas de uma piscicultura no Noroeste Paulista. A cepa em estudo foi isolada de surtos de pisciculturas do Sudeste. Para a confirmação da cepa, o produto bacteriano da PCR foi encaminhado para o Centro de Recursos Biológicos e Biologia Genômica – CREBIO (UNESP de Jaboticabal-SP) para a realização do sequenciamento com a enzima AmpliTaq polimerase e BigDye Terminator (Applied Biosystems), o DNA do gene 16SrDNA bacteriano demonstrou a presença de material genético pertencente à S. agalactiae. Para determinação da DL50 utilizou-se as seguintes concentrações bacterianas: 106 , 107 , 108 e 109 UFC (unidade formadora de colônia) por peixe, inoculadas em quatros grupos constituídos de 20 animais cada. As bactérias foram multiplicadas em meio de enriquecimento específico para bactéria sendo caldo soja triptona (TSB), o sobrenadante foi descartado e o pellet diluído em solução salina a 0,85% para ser inoculado. A dosagem utilizada para inoculação foi de 1,0 mL de um concentrado de S. agalactiae 0,5 mL intracelomático e 0,5 mL intramuscular. Após 2 horas de inoculação foi observado sinais clínicos evidentes de infecção local, sendo que no local da aplicação foi evidenciado petéquias, e com 48 horas verificou-se o início da mortalidade dos peixes do grupo 109 UFC. Os grupos inoculados com108 , 107 e 106 UFC/peixe com S. agalactiae apresentaram mortalidade gradativa, com os peixes dos grupos 107 e 106 UFC/peixe apresentando exoftalmia e natação errática, assim como inchaço no local da inoculação da cepa bacteriana. A DL50 foi estabelecida em 108 UFC/peixe onde causou a morte de 50% dos peixes. Um fato que chamou a atenção foi a alta virulência desta cepa bacteriana na concentração 109 . Desta forma, estudos genéticos adicionais serão realizados para melhorar a caracterização da cepa isolada bem como melhor entendimento da sua patogenia. Em conclusão foi verificado que esta cepa tem alta capacidade de infectar tilápias-do-Nilo. O presente trabalho oferece resultados que permitem formar subsídios para o estabelecimento de índices terapêuticos para futuras aplicações medicamentosas tanto para tratamento como para prevenção contra a Streptococcus agalactie sorotipo Ib.