Glycerophospholipid fluorescence imaging during Vaccinia Virus replication

Imagerie des glicerophospholipides pendant la réplication du virus de la Vaccine Le virus de la vaccine (VACV) est l'organisme modèle pour l'étude des Poxviridae. Son cycle de réplication dans le cytoplasme de la cellule hôte a été largement étudié par microscopie optique et microscopie électronique. Grâce à des études génétiques approfondies, le rôle de certaines des 250 protéines du virus a été élucidé. Cependant, les mécanismes d’acquisition de la membrane du virus, notamment le rôle des lipides cellulaires impliqués, restent mal connus. L’étude de la composition des membranes de VACV purifiés par spectrométrie de masse a montré qu’elles présentent un enrichissement en acide phosphatidique (PA) et en dérivés de phosphatidylinositoles (PIPs). De plus, des études in vitro ont permis d’identifier certaines protéines virales capables de se lier aux PIPs in vitro. Le rôle de ces lipides dans le cycle de vie du virus, en particulier, dans la biogenèse de ses membranes n'a pas été identifié. L'objectif de ce projet de thèse est de déterminer l’implication du PA et des PIPs dans la biogenèse des membranes virales. L’expression transitoire de protéines recombinantes contenant des domaines de liaison à ces lipides a permis de déterminer la localisation du PA et des PIPs au cours de la réplication du virus. Afin de compléter ces résultats nous avons également utilisé des anticorps reconnaissant la PI4K et le PI4P. Enfin, l’utilisation d’inhibiteurs des PI3Ks et des PI4Ks a permis d’étudier le rôle de ces kinases durant l’assemblage de la membrane virale. A l'aide de ces outils, j'ai pu montrer que la localisation de ces lipides, à l'exception du PI3P, n'est pas altérée dans les cellules infectées. De plus, aucune co-localisation n’a été observée entre ces lipides et les sites de réplication du virus. Par ailleurs, nous avons observé une co-localisation entre le PI4P et les virus enveloppés ce qui est en accord avec les études précédentes montrant que les membranes du virus mature seraient dérivées de l'appareil de Golgi. Toutefois, des inhibiteurs de la synthèse du PI3P et du PI4P n'ont pas montré d’effets sur la production des membranes virales observables par microscopie optique. En conclusion, ce travail a permis de mieux définir le rôle des lipides durant la réplication de VACV. Ces résultats mettent en lumière un rôle potentiel du PI4P au cours de l’acquisition de l’enveloppe du virus ainsi qu’un rôle PI3P et de protéines reconnaissant spécifiquement le PI3P au cours des phases tardives de la réplication.