Regulation of RORC2 expression during human CD4+T cell differentiation

Régulation de l'expression du gène RORC2 dans la régulation des cellules T CD4+ humaines La différentiation des lymphocytes Th17 dépend fortement du facteur de transcription RORγt. RORγt a été identifié pour la première fois chez la souris comme un facteur spécifique des thymocytes, jouant un rôle important dans le développement du thymus. En effet, RORγt est exprimé sélectivement dans le stade double positif (DP) et il est ensuite réprimé dans le stade simple positif (SP) ainsi que dans les cellules CD4+ naïves périphériques. Les mécanismes moléculaires qui régulent l’expression transitoire de RORγt dans le thymus et en périphérie sont peu connus. Le but de ce projet est de définir les paramètres transcriptionnels et épigénétiques en corrélation avec l'expression de RORγt chez l’homme. Afin de caractériser les mécanismes moléculaires qui contrôlent l'expression de RORγt dans les thymocytes humains, nous avons effectué une analyse des modifications épigénétiques sur l’ensemble du locus RORC. Nos résultats montrent que le locus RORC subit un remodelage étendu, qui lui confère une conformation "permissive" lors de la transition du stade Double Négatif (DN) au stade DP (augmentation de H4ac et diminution de H3K27me3). Alors que, H3K4me3, qui est un marqueur de promoteurs actifs, est présente spécifiquement au niveau du promoteur RORC2, et uniquement dans les cellules qui expriment RORC2. Une analyse similaire des marqueurs épigénétiques pour les enhancers (H3K27ac) nous a permis d'identifier plusieurs régions avec une fonction potentiellement régulatrices de l'expression de RORC2. Nous avons démontré que certaines de ces régions avaient une fonction d'enhancer in vitro. Dans les cellules T humaines CD4+ naïves périphériques, nous avons observé que la stimulation du TCR en présence de TGFβ est suffisante pour induire RORγt et un remodelage du locus RORC. Nous avons également constaté que la cyclosporine A, un inhibiteur de la voie calcineurine/NFAT, inhibe fortement l'expression de RORC2. Cette inhibition est associée ˆ une diminution des marqueurs positifs de la chromatine. De plus, nous avons démontré que l’activation des cellules induit une activation de NFAT et sa liaison au promoteur RORC2 et aux enhancers. Cette liaison coïncide avec le recrutement de p300/CBP au promoteur qui est dépendant de la calcineurine, ce qui peut permettre le recrutement d'autres facteurs (tel que NFkB) importants pour la différenciation des Th17. Nous avons Également détecté la liaison de NFAT au locus RORC dans les thymocytes. Ces données démontrent un rôle central de NFAT dans la régulation Epigénétique et transcriptionnelle du locus RORC