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Teste imunológico para detecção de antígenos de superfície do vírus da Hepatite B: uma estratégia promissora para desenvolvimento de insumo para diagnóstico

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O vírus da Hepatite B (HBV) pertence à família Hepadnaviridae, caracterizado pela presençade DNA envelopado e capacidade de infectar as células hepáticas. De acordo com o Ministérioda Saúde, no período de 1999 a 2020 foram notificados em todo o Brasil 514.678 casosconfirmados de hepatite virais, caracterizando um problema de saúde pública. Pesquisas naárea da virologia e produção biotecnológica têm usado como alternativa a expressão de genesheterólogos em sistema eucarioto, como por exemplo, do sistema de expressão utilizandobaculovírus que infecta células de inseto para expressar proteínas heterólogas. Sendo assim,o presente trabalho propôs analisar a expressão do antígeno de superfície do vírus da hepatiteB (HBV) em sistema eucarioto verificando a possível viabilidade em desenvolver um produtobiotecnológico, uma vez que o HBsAg (antígeno de superfície do vírus da hepatite B) tem umpapel fundamental no diagnóstico e prevenção da hepatite B. Para isso, uma estratégia dedna recombinante foi construída, fusionando o antígeno HBsAg junto a proteína específica dobaculovírus, e assim, permitir uma boa expressão desse antígeno. Com a expressão corretada proteína recombinante foi possível quantificá-la por meio do Quant-iT, e foram realizadostestes sorológicos imunoenzimáticos, o ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)indireto, método que se baseia na interação antígeno-anticorpo. As concentrações estavamde acordo com o esperado e para o teste ELISA, utilizamos soro de pacientes que tiveramcontato com os vírus da hepatite B, ou hepatite C ou citomegalovírus (CMV) em relação aoantígeno construído pelo sistema do Baculovírus. Isso se deu para verificar possíveis reaçõescruzadas entre esses vírus. Foi possível observar pelos testes sorológicos que há necessidadede uma melhor padronização da técnica e das amostras, pois a característica de reaçõescruzadas ficou inconclusivo. Por ser um antígeno marcador sorológico indicativo de infecçãopelo HBV, assim como, o único componente da vacina contra o HBV, a estratégia utilizada épromissora visto que foi possível obter a proteína heteróloga expressa com sucesso.Atualmente, não existem indústrias ou empresas nacionais que produzam em larga escala oHBsAg, necessitando importar vacinas e kits para diagnóstico. Portanto, há a necessidade deuma melhor padronização do teste sorológico aplicado para verificar a validade econfiabilidade estatística do experimento. Contudo, sabemos que as hepatites virais são umgrave problema de saúde pública no Brasil e no mundo, e necessitam de mais pesquisas,visando melhorar as formas de prevenção, diagnóstico e tratamento.
Title: Teste imunológico para detecção de antígenos de superfície do vírus da Hepatite B: uma estratégia promissora para desenvolvimento de insumo para diagnóstico
Description:
O vírus da Hepatite B (HBV) pertence à família Hepadnaviridae, caracterizado pela presençade DNA envelopado e capacidade de infectar as células hepáticas.
De acordo com o Ministérioda Saúde, no período de 1999 a 2020 foram notificados em todo o Brasil 514.
678 casosconfirmados de hepatite virais, caracterizando um problema de saúde pública.
Pesquisas naárea da virologia e produção biotecnológica têm usado como alternativa a expressão de genesheterólogos em sistema eucarioto, como por exemplo, do sistema de expressão utilizandobaculovírus que infecta células de inseto para expressar proteínas heterólogas.
Sendo assim,o presente trabalho propôs analisar a expressão do antígeno de superfície do vírus da hepatiteB (HBV) em sistema eucarioto verificando a possível viabilidade em desenvolver um produtobiotecnológico, uma vez que o HBsAg (antígeno de superfície do vírus da hepatite B) tem umpapel fundamental no diagnóstico e prevenção da hepatite B.
Para isso, uma estratégia dedna recombinante foi construída, fusionando o antígeno HBsAg junto a proteína específica dobaculovírus, e assim, permitir uma boa expressão desse antígeno.
Com a expressão corretada proteína recombinante foi possível quantificá-la por meio do Quant-iT, e foram realizadostestes sorológicos imunoenzimáticos, o ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)indireto, método que se baseia na interação antígeno-anticorpo.
As concentrações estavamde acordo com o esperado e para o teste ELISA, utilizamos soro de pacientes que tiveramcontato com os vírus da hepatite B, ou hepatite C ou citomegalovírus (CMV) em relação aoantígeno construído pelo sistema do Baculovírus.
Isso se deu para verificar possíveis reaçõescruzadas entre esses vírus.
Foi possível observar pelos testes sorológicos que há necessidadede uma melhor padronização da técnica e das amostras, pois a característica de reaçõescruzadas ficou inconclusivo.
Por ser um antígeno marcador sorológico indicativo de infecçãopelo HBV, assim como, o único componente da vacina contra o HBV, a estratégia utilizada épromissora visto que foi possível obter a proteína heteróloga expressa com sucesso.
Atualmente, não existem indústrias ou empresas nacionais que produzam em larga escala oHBsAg, necessitando importar vacinas e kits para diagnóstico.
Portanto, há a necessidade deuma melhor padronização do teste sorológico aplicado para verificar a validade econfiabilidade estatística do experimento.
Contudo, sabemos que as hepatites virais são umgrave problema de saúde pública no Brasil e no mundo, e necessitam de mais pesquisas,visando melhorar as formas de prevenção, diagnóstico e tratamento.

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