Roles of NHSL3 in cell migration

Roles de NHSL3 dans la migration cellulaire Les mécanismes moléculaires qui sous-tendent la migration https://adum.fr/as/infosoutenances.pl?mat=142473#cellulaire restent partiellement compris, malgré de nombreuses avancées récentes. Ici, nous avons identifié NHSL3 comme un nouveau régulateur de la migration de cellules uniques et collectives. NHSL3 est un membre récemment identifié de la famille des protéines responsables du syndrome de Nance-Horan, dont le gène NHSL3, également connu sous le nom de KIAA1522, code pour quatre isoformes à travers différents sites d'initiation de la transcription et d'épissage alternatif dans les cellules mammaires humaines MCF10A. En utilisant des protéines de fusion GFP, nous avons montré que les trois isoformes longues étaient localisées à l’extrémité du lamellipode et aux contacts cellule-cellule, alors que l'isoforme courte n'était présente qu'à l’extrémité du lamellipode. Nous avons montré que le knock-out (KO) de NHSL3, qui inactivent toutes les isoformes dans les cellules MCF10A, altère la migration de cellules individuelles et de monocouches cellulaires collectives. Les monocouches KO présentent une diminution de la vitesse des cellules suiveuses qui ne suivent plus aussi efficacement que les sauvages les cellules pionnières dans un test de réparation de blessure. Quand les cellules KO sont isolées, elles migrent de manière plus persistante que les cellules parentales. Nous avons ensuite cherché à sauver le phénotype des cellules KO en exprimant les différentes isoformes de NHSL3. Toutes les isoformes ont plus ou moins sauvé le phénotype de migration collective, la plus efficace étant l'isoforme i2 et la moins efficace étant l'isoforme courte i3S. En revanche, et à notre grande surprise, seule l'isoforme courte i3S a sauvé la migration des cellules individuelles. De plus, un siRNA spécifique qui cible spécifiquement l'isoforme courte a montré le même phénotype de migration des cellules individuelles que le KO de NHSL3 qui inactive toutes les isoformes.Afin de mieux comprendre les mécanismes impliqués, nous avons recherché les partenaires des différentes isoformes par protéomique. Puis nous avons identifié des partenaires directs potentiels à l'aide d'un pipeline bioinformatique basé sur AlphaFold2 qui prédit les sites d’interaction putatifs. Les isoformes longues de NHSL3 interagissent avec des régulateurs bien connus du cytosquelette d'actine, tels que le complexe régulateur WAVE (WRC), IRSp53 et les protéines MENA/VASP. L'isoforme courte i3S interagit avec beaucoup moins de protéines, aucune d'entre elles n'étant un candidat évident pour contrôler la persistance de la migration des cellules individuelles. Dans les tests de migration collective, une forme mutante de i2 qui ne se lie pas aux protéines MENA/VASP empêche le recrutement des protéines MENA/VASP aux contacts cellule-cellule et ne sauve pas le phénotype de migration collective des cellules NHSL3 KO. Dans les tests sur cellules individuelles, une forme mutante de i3S dont l'interaction avec son partenaire 14-3-3θ est altérée ne recrute pas 14-3-3θ à l’extrémité du du lamellipode, et ne sauve pas le phénotype de migration de cellules individuelles. Pris ensemble, ces résultats démontrent que NHSL3 régule à la fois la migration des cellules uniques et collectives par des mécanismes différents qui impliquent des interactions spécifiques avec les protéines 14-3-3θ et MENA/VASP, respectivement.