Single domain antibodies for the treatment of Hemophilia A

Anticorps à domaine unique pour le traitement de l'hémophilie A L'hémophilie A est une maladie hémorragique rare liée au chromosome X, consécutive à l'absence de facteur VIII (FVIII) pro-coagulant. La prévention ou le traitement des hémorragies chez les patients atteints d'hémophilie A sont obtenus par l'injection de molécules procoagulantes dérivées du FVIII ou d'agents de dérivation. Cependant, les médicaments disponibles ont une demi-vie courte, sont immunogènes et/ou ne compensent pas entièrement le FVIII manquant. L'objectif principal de mon projet de thèse est de développer une nouvelle molécule de FVIII qui restaure entièrement l'activité procoagulante du FVIII, possède une longue demi-vie et est dépourvue d'immunogénicité. À cette fin, j'ai conçu un FVIII recombinant fusionné à des nanocorps (VHH) spécifiques du récepteur x des plaquettes : FVIII-VHH. Mon hypothèse est que le FVIII lié aux plaquettes devrait bénéficier de la demi-vie de 7 à 9 jours des plaquettes dans le sang. Au cours de ma thèse, j'ai sélectionné et caractérisé le VHH spécifique du récepteur plaquettaire x. J'ai également produit et caractérisé des protéines FVIII fusionnées au VHH, validé leur activité procoagulante spécifique et leur liaison aux plaquettes. Cependant, de manière inattendue, les molécules FVIII-VHH se sont avérées activer les plaquettes. Après une étude rétrospective, nous avons documenté une liaison de faible affinité des domaines C1 et C2 du FVIII au récepteur x des plaquettes. Cette interaction pourrait éventuellement induire une activation des plaquettes par réticulation des récepteurs. Suite à cette découverte, j'ai optimisé les fragments FVIII et VHH du FVIII-VHH pour réduire l'activation plaquettaire en introduisant des mutations dans les résidus C1 et C2 du FVIII, et augmenter l'affinité de liaison au récepteur plaquettaire x, respectivement. Après l'introduction des mutations C1 et C2, les constructions FVIII-VHH ont montré une activation plaquettaire plus faible par rapport au FVIII-VHH sans la mutation C1C2, mais l'activation plaquettaire est restée au-dessus du seuil in vitro. L'activation plaquettaire déclenchée par les protéines de fusion FVIII-VHH optimisées doit encore être validée dans un cadre plus physiologique in vivo. À cette fin, nous générons un nouveau modèle préclinique de souris déficientes pour le FVIII et transgéniques pour le récepteur plaquettaire humain x. Les travaux futurs confirmeront la demi-vie accrue du FVIII-VHH optimisé, valideront son efficacité hémostatique dans des modèles de saignement aigu et détermineront son immunogénicité.