Identificação de leveduras isoladas de leite de vacas com mastite por meio de técnicas espectroscópicas

Uma identificação rápida e acurada de microrganismos presentes no leite é desafiadora para laboratórios de diagnóstico e de pesquisa. As técnicas espectroscópicas se destacam como uma alternativa inovadora para a identificação de microrganismos, pois utilizam uma quantidade muito pequena de biomassa e pouco ou nenhum reagente, o que reduz bastante o tempo de identificação microbiológica. O objetivo deste trabalho foi utilizar três técnicas espectroscópicas, a espectrometria de massa MALDI-TOF, a espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR-ATR) e a espectroscopia Raman para a identificação de leveduras isoladas de leite de vacas com mastite. O experimento foi realizado com onze leveduras isoladas de amostras de leite obtidas de quartos mamários de vacas leiteiras. Os microrganismos foram, previamente, isolados em Ágar Infusão de Cérebro e Coração – BHI e incubados por 24 h a 35 ºC. As análises por MALDI-TOF MS foram feitas no equipamento LT Microflex (Bruker Daltonics), em duplicata. As análises de FTIR-ATR foram realizadas, em triplicata, no equipamento VERTEX-70 FT-MIR (Bruker). Os espectros obtidos foram convertidos em arquivos de texto utilizando os softwares OPUS 6.5.97 e Origin Pro 8. As medidas Raman foram obtidas no equipamento Raman (WITEC alpha 300 AR). Por meio de MALDI-TOF MS as leveduras foram identificadas nos gêneros Candida, Pichia, Diutina, Cryptococcus, Kluyveromyces e Saccharomyces. Através dos espectros FTIR-ATR foi possível comparar os picos das amostras, a fim de caracterizá-las de acordo com os seus grupos químicos funcionais constituintes. A Análise de Componentes Principais (PCA) permitiu distinguir as semelhanças e diferenças entre as leveduras pela observação dos agrupamentos. Por meio da espectroscopia Raman foram obtidas imagens e espectros individuais de cada amostra, sendo possível relacionar as bandas típicas nestes espectros com os grupos químicos funcionais celulares, complementando a análise por FTIR – ATR. A PCA dos espectros por FTIR-ATR e por espectoscopia Raman, realizada através do software PAST versão 4.13, evidenciou que as leveduras se agruparam por semelhanças dos constituntes celulares e também por semelhanças de espécies. Este trabalho mostra como conclusão formas alternativas, eficientes e precisas para caracterizar e diferenciar espécies de leveduras tanto pela técnica de espectrometria de massa, quanto pelos métodos de espectroscopia óptica.