Penelitian bertujuan mempelajari respon pemberian asam humat pada beberapa macam kombinasi medium tumbuh  terhadap kandungan senyawa aktif pada tanaman Pegagan (Centella asiatica L. Urb). Melalui pemberian pupuk asam humat pada kombinasi medium diharapkan pertumbuhan dan metabolism tanaman meningkat yang kemudian berdampak pada meningkatnya senyawa aktif hasil metabolit primer. Medium yang digunakan adalah : tanah & pasir (1 : 1), tanah & sekam (1 : 1), dan tanah & zeolite (1 : 2). Asam humat yang diperlakukan ada 4 konsentrasi, yaitu : 0 gr/kg medium, 4 gr/kg medium, 8 gr/kg medium dan 12 gr/kg medium.  Metode penelitian yang digunakan adalah eksperimen  menggunakan Rancangan Acak Lengkap dengan pola perlakuan factorial. Sebagai Faktor Utama adalah kombinasi medium, dan sebagai Faktor Kedua adalah konsentrasi asam humat. Parameter yang diamati adalah kandungan alkaloid, flavonoid, dan terpenoid. Hasil penelitian menunjukkan bahwa medium tanam tanah dengan pasir dengan penambahan asam humat 8 gr/kg medium efektif dalam meningkatkan kandungan alkaloid dan biomassa tanaman pegagan. Sedangkan kandungan flavonoid tertinggi diperoleh pada medium tanah dan zeolite dengan penambahan asam humat 4gr/kg medium.  Teridentifikasi adanya senyawa terpenoid dengan adanya cincin berwarna coklat pada ekstrak yang dilarutkan dalam chloroform , asam asetat dan asam sulfat pekat.